EZsep™ AFB&G免疫親和柱用于玉米中黃曲霉毒素B族的檢測

前言：

黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，簡寫為AFB1）是已知的化學物質中致癌性非常強的一種，對人和動物具有強烈的毒性，其毒性作用主要是對肝臟的損害。

黃曲霉毒素B1存在于土壤，動植物各種堅果，特別是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、調味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也經常發現黃曲霉毒素。一般以熱帶和亞熱帶等南方高溫、高濕地區受污染最為嚴重，食品中黃曲霉毒素的檢出率比較高。黃曲霉毒素耐熱，280℃才可裂解，故一般烹調加工溫度下難以被破壞。國家質檢總局規定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項目之一。

本文參考《GB 5009.22-2016 食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定 第三法為高效液相色譜-柱后衍生法》，利用EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，貨號：PZ24102）凈化樣品，再通過高效液相色譜儀進行檢測，建立了一種玉米中黃曲霉毒素B族的分析方法。

關鍵詞：

黃曲霉毒素B族，免疫親和，高效液相色譜

1 實驗過程

1.1 儀器與試劑

SPE1000全自動固相萃取系統，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

LC600二元高壓梯度高效液相色譜（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）配光化學衍生器；

E.T.氮吹濃縮儀（貨號：C020017），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠；

EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，貨號：PZ24102），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

超純水；

0.1%吐溫-水：1mL的吐溫-20，加水定容至1L。

1.2 工作液配制

乙腈中4種黃曲霉毒素混標儲備液：1.0μg/mL，壇墨質檢 。

黃曲霉毒素混標中間液：移取黃曲霉毒素混標儲備液1mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為100ng/mL的中間液。

黃曲霉毒素混標工作液：移取黃曲霉毒素混標中間液1mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10ng/mL的工作液。

分別移取100ng/mL的黃曲霉毒素混標中間液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中，用初始流動相定容至刻度，得到濃度依次為0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的標準工作溶液。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

 稱取5g玉米試樣(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30)，渦旋混勻，用均質器10000r/min上下震蕩均質3 min，在6000r/min下離心20min。準確移取4mL上清液，加入46mL0.1%吐溫-水，混勻，待凈化。

1.3.2 凈化與濃縮

將低溫保存的EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司，貨號：PZ24102）恢復至室溫，待免疫親和柱內原有液體流盡后，移取上述待凈化液上樣，上樣結束后用20mL水分2次淋洗萃取柱，之后在真空狀態下干燥1min，最后用2mL甲醇洗脫。洗脫液在40℃下氮吹濃縮至近干，再用流動相定容至1 mL，渦旋混勻，0.22μm濾膜過濾，待檢測。

1.3.3 高效液相色譜檢測條件

色譜柱：Promosil C18（5μm，4.6*250mm）

波長：激發波長360nm，發射波長440nm

流速：1.0mL/min

柱溫：40℃

進樣量：20μL

流動相：超純水：甲醇+乙腈（50+50）=68:32

2 實驗結果

圖1 標準樣品色譜圖

圖2 加標樣品色譜圖

圖3空白樣品色譜圖

3 結論 

本實驗使用EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司，貨號：PZ24102）對玉米中黃曲霉毒素B族進行凈化后通過高效液相色譜儀進行檢測，該方法的加標回收率在81.1%~93.2%之間，RSD在2.2%~2.7%之間。回收率和穩定性滿足標準要求，說明EZsep^TM AFB&G免疫親和柱能很好的完成方法中的凈化工作，并且結果穩定、可靠。

4 參考文獻

[1] GB 5009.22-2016 食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定 第三法高效液相色譜-柱后衍生法

表1  加標回收率